Take care

Take care

Results (Thai) 1:

ดูแล

Results (Thai) 2:

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОД
Флуоресцентные зонды 8-anilino-1-нафталенесульфоник
кислоты (ANS) и пирена, АТФ, ADP, Mops, NADH, натрий
дезоксихолат, гистидин, имидазол, сахароза, глицин,
EGTA и EDTA были приобретены у Sigma (США).
Трис, пируватская киназа и фосфоненописрупивате
из Реанала (Венгрия); лактат дегидрогеназы был из
Ферак (Германия); SDS и карбоцианин красителя пятна-
Все они были из Сервы (Германия). Все остальные реагенты были
реагент класса или лучше.
Взрослые суслики Spermophilus undulatus были
собранные живой ловушки в Якутии и были сохранены
в животном фонде Института клеток
Биофизика (Пущино, Московская область) в индивидуальном
клетки при 20-25 градусах Цельсия при естественном дневном свете. Звери были
с удовлетворительным пищевым, водным и гнездовым материалом.
В ноябре животных поместили в темную комнату в
температура 2-4 градусов по Цельсию. Для экспериментов, лето активное
(температура тела 37 градусов по Цельсию) и зимняя спячка (тело
температуры 2-5 градусов по Цельсию животных были убиты путем обезглавливания
в июне-июле и январе-феврале в середине
спячку спячки, соответственно. Задние скелетные мышцы ноги
были немедленно отрезаны и погрузились в жидкий азот
для транспортировки. Для длительного хранения (в течение 2-4 недель) тканей
были переведены в глубокую морозильную камеру (ниже 70 градусов по Цельсию).
В этом исследовании данные, полученные в течение летней зимы
сезоны 1998, 1999 и 2000 присутствуют.
Фрагменты SR от скелетных мышц задней ноги
суслики были получены дифференциальной центрифугации
С незначительными модификациями, описанными ранее.
Окончательные препараты СР были заморожены в жидком азоте
и хранится при 70 градусах Цельсия.
Концентрация белка измерялась в соответствии с
Lowry et al. (использование BSA) в качестве стандарта. Содержание
фосфолипиды в препаратах СР измерялись послеминеральноза, после чего pi измерения в соответствии с
Бартлетт (26 лет).
Активность Ca-ATPase измерялась с помощью
ферментная система (пирувате киназа и лактат дегидрогеназа)
как описано в полных деталях ранее.
SDS-PAGE был проведен в соответствии с Laemmli
с использованием 3% укладки и 3-20% градиентных ходовых гелей
(28). Тяжелые цепи миозина (205 кД), б-галактозидаза (116 кД),
фосфорилаза b (97,4 кД), BSA (66 kD), овальбумин
(45 kD), и карбоангидраф (29 kD) были использованы в качестве белка
маркеры для измерения молекулярных масс СР
Белки. После электрофореза гели были зафиксированы и
промывают 3 раза в 25% этанола и окрашены катионом
карбоцианин краситель (Stains-All) в растворе, содержащем
25% этанола, 7,5% формамид, 0,0025% Пятна-Все, и
30 мМ Трис, рН 8,8, для 36-48 ч в темноте. Гели были
кратко обесценились в 25% этанола в темноте и отсканированы
на лазерном дензитометре UltroScan XL на 595 нм (LKB,
Швеции). Гели были, наконец, обездоленных в 25% этанола
в свете. Впоследствии гели были запятнаны
Coomassie Блестящий синий R-250 и обесценился по стандарту
Процедуры. Затем они были отсканированы на UltroScan
XL лазерный денситометр на той же длине волны. Белок
пиковые области были рассчитаны по программе GelScanXL
(LKB, Швеция). Лечение препаратов СР с
куприкфенанхролин был проведен, как описано ранее
[29].
В настоящем исследовании АНС и пирен использовались в качестве
флуоресцентные зонды. ANS (5-100 мМ) был добавлен в СР
мембраны (0,2 мг/мл) при 10 мм мопсах, рН 7,0.
Образец флуоресценции был возбужден на 360 нм и зарегистрирован
на 480 нм с спектральной шириной захватывающих и анализа
монохроматор щели набор для 5-нм разрешение с помощью
Спектрофлуориметр Hitachi F-3000. Явные Kd и Fmax
значения для ANS были рассчитаны с использованием двойного взаимного
(1/F против 1 /ANS) сюжеты (30). Пирена флуоресценция была
возбужденных на 335 нм (общая флуоресценция) и на 285 нм
(индуцированная флуоресценция) со спектральной шириной
захватывающий монохроматор щели набор для 5-нм разрешение и
зарегистрировано на 350-470 нм при спектральной ширине
анализ монохроматора щели набор для 1,5-нм разрешение.
Среда содержала 10 мМ Мм Мps, рН 7.0, 100 mM
KCl, 0,5 мг/мл белка SR и 12 мм пирена. Teh
степень эксимеризации пирена была рассчитана как
соотношение интенсивности флуоресценции на уровне 465 нм (экзимерная форма)
и 373 нм (мономерная форма). Все расчеты были проведены
с использованием стандартных методов .
Каждый параметр для каждого отдельного препарата SR
измеряется не менее 3 раз, а средние значения для
параметры были рассчитаны для дальнейших статистических расчетов.
В таблицах средние значения для ряда
SR препараты изолированы от различных животных
представлено - стандартное отклонение (среднее и SD). Число
препаратов, используемых, указаны в скобках.
Статистические расчеты производились с использованием студенческих t-критерий
[31].

Results (Thai) 3:

ระวัง