Phosphotriesterases (PTEs) have bee

Phosphotriesterases (PTEs) have been isolated from a range of bacterial species, including Agrobcaterium radiobacter (PTEAr),
and are efficient enzymes with broad substrate ranges. The turnover rate of PTEAr for the common organophosphorous
insecticide malathion is lower than expected based on its physical properties; principally the pka of its leaving group. In this
study, we rationalise the turnover rate of PTEAr for malathion using computational docking of the substrate into a high
resolution crystal structure of the enzyme, suggesting that malathion is too large for the PTEAr binding pocket. Protein
engineering through combinatorial active site saturation testing (CASTing) was then used to increase the rate of malathion
turnover. Variants from a CASTing library in which Ser308 and Tyr309 were mutated yielded variants with increased activity
towards malathion. The most active PTEAr variant carried Ser308Leu and Tyr309Ala substitutions, which resulted in a ca.
5000-fold increase in kcat/KM for malathion. X-ray crystal structures for the PTEAr Ser308LeuTyr309Ala variant demonstrate
that the access to the binding pocket was enhanced by the replacement of the bulky Tyr309 residue with the smaller
alanine residue

Results (Thai) 1:

Phosphotriesterases (PTEs) ได้แยกจากแบคทีเรียสายพันธุ์ รวม Agrobcaterium radiobacter (PTEAr),และมีเอนไซม์ที่มีประสิทธิภาพ มีช่วงกว้างพื้นผิว อัตราการหมุนเวียนของ PTEAr สำหรับทั่วไป organophosphorousยาฆ่าแมลงไธออจะต่ำกว่าที่คาดไว้ตามคุณสมบัติทางกายภาพ หลัก pka ของกลุ่มออกแบบ ในที่นี้ศึกษา เรา rationalise อัตราหมุนเวียนของ PTEAr สำหรับไธออใช้คำนวณเทียบของพื้นผิวในสูงโครงสร้างผลึกละเอียดของเอนไซม์ การแนะนำว่า ไธออใหญ่เกินไปสำหรับกระเป๋าผูก PTEAr โปรตีนวิศวกรรมผ่านความอิ่มตัวปัญหาใช้งานไซต์ที่ทดสอบ (หล่อ) แล้วใช้ในการเพิ่มอัตราของไธออหมุนเวียน ตัวแปรจากรีหล่อที่ Ser308 และ Tyr309 ได้กลายผลย่อย มีกิจกรรมเพิ่มขึ้นต่อไธออ ตัวแปร PTEAr อยู่มากที่สุดดำเนินการ Ser308Leu และ Tyr309Ala แทน ซึ่งทำให้เกิด ca5000-fold เพิ่มใน kcat/KM สำหรับไธออ แสดงให้เห็นถึงโครงสร้างผลึกเอ็กซ์เรย์ตัวแปร PTEAr Ser308LeuTyr309Alaว่า ถึงกระเป๋าผูกถูกเพิ่ม โดยการแทนที่ของตกค้าง Tyr309 ขนาดใหญ่กับตัวเล็กสารตกค้างอะลานีน

Results (Thai) 2:

Phosphotriesterases (PTEs) ได้รับการแยกออกจากช่วงของแบคทีเรียสายพันธุ์รวมทั้ง Agrobcaterium radiobacter (PTEAr),
และมีเอนไซม์ที่มีประสิทธิภาพที่มีช่วงกว้างพื้นผิว อัตราการหมุนเวียนของ PTEAr สำหรับทั่วไป organophosphorous
malathion ยาฆ่าแมลงเป็นราคาที่ต่ำกว่าที่คาดไว้ขึ้นอยู่กับคุณสมบัติทางกายภาพของตน โดยเฉพาะอย่างยิ่ง PKA ของกลุ่มออกของ ในการนี้
การศึกษาเราหาเหตุผลเข้าข้างตนเองอัตราการหมุนเวียนของ PTEAr malathion สำหรับใช้เชื่อมต่อคอมพิวเตอร์ของพื้นผิวเป็นสูง
โครงสร้างผลึกละเอียดของเอนไซม์บอกว่า malathion มีขนาดใหญ่เกินไปสำหรับกระเป๋าผูกพัน PTEAr โปรตีน
วิศวกรรม combinatorial ผ่านการทดสอบความอิ่มตัวของเว็บไซต์ที่ใช้งาน (หล่อ) ถูกนำมาใช้เพื่อเพิ่มอัตราการ malathion
หมุนเวียน สายพันธุ์จากห้องสมุดหล่อที่ Ser308 และ Tyr309 ถูกกลายพันธุ์ผลสายพันธุ์ด้วยกิจกรรมที่เพิ่มขึ้น
ต่อ malathion ตัวแปร PTEAr ใช้งานมากที่สุดและดำเนิน Ser308Leu Tyr309Ala แทนซึ่งส่งผลให้รัฐแคลิฟอร์เนียได้
เพิ่มขึ้น 5000 เท่าใน kcat / KM สำหรับ malathion X-ray โครงสร้างผลึกสำหรับตัวแปร PTEAr Ser308Leu Tyr309Ala แสดงให้เห็น
ว่าการเข้าถึงกระเป๋าผูกพันได้รับการปรับปรุงโดยการเปลี่ยนสารตกค้าง Tyr309 ขนาดใหญ่ที่มีขนาดเล็กลง
เหลืออะลานีน

Results (Thai) 3:

phosphotriesterases ( ptes ) ถูกโดดเดี่ยวจากช่วงของแบคทีเรียชนิด รวมถึง agrobcaterium radiobacter ( ptear )
และเอนไซม์ที่มีประสิทธิภาพในวงกว้างหลากหลายช่วง อัตราการลาออกของ ptear โดยทดสอบยาฆ่าแมลง organophosphorous
ต่ำกว่าคาด ขึ้นอยู่กับคุณสมบัติทางกายภาพของ หลักความของมันออกจากกลุ่ม ในการศึกษานี้
,เราหาเหตุผลเข้าข้างตนเองอัตราการหมุนเวียนของ ptear สำหรับทดสอบโดยใช้การคำนวณ docking ของพื้นผิวในความละเอียดสูง
โครงสร้างผลึกของเอนไซม์ แนะนำให้ทดสอบมีขนาดใหญ่เกินไปสำหรับกระเป๋าผูก ptear . วิศวกรรมโปรตีน
ผ่านเว็บไซต์ของการทดสอบการใช้งาน ( หล่อ ) คือใช้เพิ่มอัตราการหมุนเวียนมาลาไทออน

สายพันธุ์จากห้องสมุดที่ ser308 tyr309 หล่อและเป็นสายพันธุ์กลายพันธุ์ จากกิจกรรมที่เพิ่มขึ้น
ต่อ Malathion . ตัวแปรที่ใช้งานมากที่สุดและ ptear แบก ser308leu tyr309ala แทน ซึ่งส่งผลให้เกิด .
5 พับเพิ่ม kcat / km เพื่อทดสอบ . เรย์โครงสร้างผลึกสำหรับ ptear ser308leu tyr309ala สาธิต
แปรที่เข้าถึงกระเป๋าผูกเพิ่มขึ้นโดยเปลี่ยนจากกาก tyr309 ขนาดใหญ่กับขนาดเล็ก
กาก
อะลานีน