4. Experimental4.1. Plant material

4. Experimental
4.1. Plant material and growth conditions
Seeds of S. lycopersicum variety Kashi vishesh (cv. H-86) were
rinsed with tween-20, treated with 1% carbendazim for 10 min
followed by surface sterilization with 0.3% sodium hypochlorite.
After washing the surface sterilized seeds were germinated on half
strength Murashige and Skoog (1962) MS-agar medium under
aseptic conditions. Cotyledons from 6 to 7 days old seedlings were
used as explants for transformation.
4.2. Gene construct and transfer
Agrobacterium tumifaciens strain GV 3101 having a binary vector
pBinAR harbouring ZAT12 (Accession No. DQ166621) (Singh et al.,
2005) gene construct (Fig. 1) were used for infecting the cotyledonary
leaf explants followed by selection for kanamycin (100 mg l1)
resistance and regeneration of transgenic plants (Singh et al.,
2010). The transformed cotyledonary explants were kept for two
days of co-cultivation and transferred to regeneration medium
(Fig. 2a and b). After 2 weeks some explants grew larger and thicker
and others were bleached due to the selection pressure of the
antibiotic (Fig. 2c). The selection pressure of kanamycin was
increased with subsequent change of regeneration medium and
finally after 6 weeks the positively transformed tomato shoots
appeared from the edges of the explants (Fig. 2d). The 2–3 cm long
shoots (Fig. 2e) were cut from the base of the explants and
transferred on rooting medium supplemented with 100 mg l1 of

Results (Thai) 2:

4. การทดลอง
4.1 วัสดุอาคารและสภาวะการเจริญเติบโตเมล็ดพันธุ์แห่งเอส lycopersicum หลากหลายชิ Vishesh (พันธุ์. H-86) ได้รับการล้างด้วยทวี-20 รับการรักษาด้วย carbendazim 1% เป็นเวลา 10 นาทีตามด้วยการฆ่าเชื้อที่พื้นผิวด้วยโซเดียมไฮโปคลอไรต์0.3%. หลังจากล้างพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อ เมล็ดงอกในครึ่งแรงของอาหารสูตรMurashige และ Skoog (1962) สูตร MS-วุ้นภายใต้สภาพปลอดเชื้อ ใบเลี้ยง 6-7 วันต้นกล้าเก่าถูกนำมาใช้เป็นชิ้นส่วนสำหรับการเปลี่ยนแปลง. 4.2 สร้างยีนและการถ่ายโอนAgrobacterium tumifaciens ความเครียด GV 3101 มีเวกเตอร์ไบนารีpBinAR เก็บงำ ZAT12 (เลข DQ166621) (ซิงห์ et al., 2005) สร้างยีน (รูปที่ 1). ถูกนำมาใช้สำหรับการติดไวรัส cotyledonary ชิ้นใบตามด้วยการเลือกกานามัยซิน (100 มิลลิกรัมต่อลิตร? 1) ความต้านทานและการงอกของพืชดัดแปรพันธุกรรม (Singh et al., 2010) เปลี่ยนชิ้น cotyledonary ถูกเก็บไว้เป็นเวลาสองวันของการร่วมเพาะปลูกและการถ่ายโอนไปยังสื่อการฟื้นฟู(รูป. 2a และ b) หลังจาก 2 สัปดาห์บางชิ้นใหญ่ขึ้นและหนาและอื่นๆ ถูกฟอกขาวเนื่องจากการดันการเลือกยาปฏิชีวนะ(รูป. 2c) ความดันเลือกของกานามัยซินได้เพิ่มขึ้นกับการเปลี่ยนแปลงที่ตามมาของการฟื้นฟูและขนาดกลางในที่สุดหลังจาก6 สัปดาห์เปลี่ยนบวกยอดมะเขือเทศปรากฏจากขอบของชิ้น(รูป. 2d) 2-3 เซนติเมตรยาวหน่อ(รูป. 2e) ถูกตัดออกจากฐานของชิ้นส่วนและโอนในการขจัดเสริมขนาดกลางที่มี100 มิลลิกรัมต่อลิตร 1 ของ

Results (Thai) 3:

4 . ทดลอง
4.1 . วัสดุพืชและการเจริญเติบโตของเมล็ดพันธุ์ . lycopersicum เงื่อนไข
คาชิ Vishesh พันธุ์ h-86 )
ล้างด้วย tween-20 , รักษาด้วยคาร์เบนดาซิม 1 ต่อ 10 นาที
ตามด้วยฆ่าเชื้อที่พื้นผิว 0.3% โซเดียมไฮโปคลอไรต์ .
หลังจากล้างฟอกฆ่าเชื้อเมล็ดงอกครึ่ง
พลังอาหารสูตร Murashige and Skoog ( 1962 ) นางสาวอาหารวุ้นใต้
สภาพปลอดเชื้อการแสดงออกจาก 6 ไป 7 วัน ต้นกล้าอายุ
ใช้เป็นอาหารสำหรับการเปลี่ยนแปลง .
4.2 . ยีนที่สร้างและโอน
Agrobacterium tumifaciens GV 3101 สายพันธุ์มีไบนารีเวกเตอร์
pbinar กับ zat12 ( หนังสือไม่ dq166621 ) ( Singh et al . ,
2005 ) ยีนสร้าง ( รูปที่ 1 ) ใช้สำหรับการติดเชื้อ cotyledonary
ใบ เลี้ยงตามด้วยการเลือกกานามัยซิน ( 100 มก. แอล  1 )
ความต้านทานและการงอกของพืชดัดแปรพันธุกรรม ( Singh et al . ,
2010 ) เปลี่ยน cotyledonary เลี้ยงไว้ 2
วันเพาะ Co และโอน

( รูปที่ 2A และ B ( ใหม่ ) หลังจาก 2 สัปดาห์บางชิ้นส่วนใหญ่ขึ้นและหนา
และผู้อื่นมีฟอกเนื่องจากการความดันของ
ยาปฏิชีวนะ ( รูปที่ 2 ) การเลือกความดันของทั้งสองคือ
เพิ่มขึ้นกับการเปลี่ยนแปลงที่ตามมาของการขนาดกลาง และในที่สุด หลังจาก 6 สัปดาห์เปลี่ยน

บวกมะเขือเทศยอดปรากฏจากขอบของอาหาร ( รูปที่ 2 ) 2 - 3 ซม. ยาว
( รูปที่ 2 ) ถูกยิงจากฐานของการเจริญเติบโตและ
โอนบนอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วยราก 100 มก. แอล  1 แห่ง