The promising direction of the deve

The promising direction of the development of a modern glucometer is the construction of sensing
element on the basis of stained (dyed) protein which changes its fluorescence upon glucose binding.
One of the proteins that can be used for this purpose is the D-trehalose/D-maltose-binding protein (TMBP)
from the thermophilic bacteria Thermococcus litoralis. We investigated the physical–chemical properties
of the protein and evaluated its stability to the denaturing action of GdnHCl and heating. It was confirmed
that TMBP is an extremely stable protein. In vivo, the intrinsic ligands of TMBP are trehalose and maltose,
but TMBP can also bind glucose. The dissociation constant of the TMBP–glucose complex is in the range of
3–8 mM. The binding of glucose does not noticeably change the intrinsic fluorescence of the TMBP. To
register protein-glucose binding, we used the fluorescence of the thiol-reactive dye BADAN attached to
TMBP. Because the fluorescence of BADAN attached to the cysteine Cys182 of TMBP does not change upon
glucose binding, the mutant forms TMBP/C182S/X_Cys were created. In these mutant proteins, Cys182 is
replaced by Ser, removing intrinsic binding site of BADAN and a new dye binding sites were introduced.
The largest increase (by 1.4 times) in the intensity of the dye fluorescence was observed upon TMBP/
C182S/A14C-BADAN–Glc complex formation. The dissociation constant of this complex is 3.4 ± 0.1 mM.
We consider TMBP/C182S/A14C mutant form with attached fluorescent dye BADAN as a good basis for
further research aimed to develop of series of TMBP mutant forms with different affinities to glucose
labeled with fluorescent dyes.

Results (Thai) 1:

ทิศทางแนวโน้มของการพัฒนาเครื่องตรวจน้ำตาลในสมัยมีการก่อสร้างการตรวจวัดองค์ประกอบพื้นฐานของย้อม (ย้อม) โปรตีนที่เรืองแสงเมื่อกลูโคสรวมการเปลี่ยนแปลงโปรตีนที่สามารถใช้สำหรับวัตถุประสงค์นี้อย่างใดอย่างหนึ่งคือโปรตีน D trehalose/D-maltose-ผูก (TMBP)จากแบคทีเรีย thermophilic Thermococcus ทะเล เราตรวจสอบคุณสมบัติทางกายภาพเคมีของโปรตีน และในการประเมินความเสถียรดำเนินการ denaturing GdnHCl และเครื่องทำความร้อน มันได้รับการยืนยันTMBP ที่เป็นโปรตีนตัวอย่างมั่นคง ในสัตว์ทดลอง ligands ลักษณะของ TMBP มี trehalose maltoseแต่ TMBP ยังสามารถผูกกลูโคส คง dissociation ของคอมเพล็กซ์ TMBP – กลูโคสอยู่ในช่วงของ3-8 มม. รวมของกลูโคสเปลี่ยนแปลงเรืองแสงลักษณะของ TMBP เห็นได้ชัด ถึงลงทะเบียนโปรตีนกลูโคสผูก เราใช้สารเรืองแสงของสีย้อมปฏิกิริยา thiol ชัยบาดาลกับTMBP เนื่องจากการเรืองแสงของชัยบาดาลกับไส้ Cys182 TMBP ไม่เปลี่ยนแปลงเมื่อสร้างกลูโคสผูก แบบกลายพันธุ์ TMBP/C182S/X_Cys โปรตีนกลายพันธุ์เหล่านี้ Cys182 เป็นแทน โดย Ser เอาลักษณะการผูกไซต์ชัยบาดาลและสีใหม่ผูกไซต์ได้แนะนำเพิ่มขึ้นที่ใหญ่ที่สุด (โดยเวลา 1.4) ในความเข้มข้นของสารเรืองแสงสีถูกตรวจสอบเมื่อ TMBP /C182S/A14C-ชัยบาดาล-Glc ซับซ้อนก่อ คง dissociation คอมเพล็กซ์นี้เป็น 3.4 ± 0.1 mMเราพิจารณาฟอร์ม mutant TMBP/C182S/A14C กับฟลูออเรสเซนต์แนบย้อมชัยบาดาลเป็นพื้นฐานดีวิจัยเพิ่มเติมเพื่อการพัฒนาของระกลายพันธุ์ TMBP affinities แตกต่างกับน้ำตาลกลูโคสติดป้ายชื่อ ด้วยสีเรืองแสง

Results (Thai) 2:

ทิศทางที่มีแนวโน้มของการพัฒนาของ Glucometer ที่ทันสมัยคือการก่อสร้างของการตรวจวัด
องค์ประกอบบนพื้นฐานของการย้อมสี (ย้อม) โปรตีนซึ่งการเปลี่ยนแปลงการเรืองแสงที่มีต่อระดับน้ำตาลในผลผูกพัน.
หนึ่งของโปรตีนที่สามารถนำมาใช้เพื่อการนี้คือ D-ทรีฮาโล / D-มอลโตส-binding protein (TMBP)
จากแบคทีเรียทนร้อน Thermococcus litoralis เราตรวจสอบคุณสมบัติทางกายภาพและทางเคมี
ของโปรตีนและการประเมินความมั่นคงของการกระทำของขั้นเปลี่ยน GdnHCl และเครื่องทำความร้อน มันได้รับการยืนยัน
ว่า TMBP เป็นโปรตีนที่มีเสถียรภาพมาก ในร่างกายที่แท้จริงของแกนด์ TMBP มีทรีฮาโลและมอลโตส,
แต่ TMBP ยังสามารถผูกกลูโคส คงแยกออกจากกันที่ซับซ้อน TMBP กลูโคสอยู่ในช่วงของ
3-8 มิลลิ ผูกพันของกลูโคสอย่างเห็นได้ชัดไม่ได้เปลี่ยนการเรืองแสงที่แท้จริงของ TMBP เพื่อ
ลงทะเบียนโปรตีนกลูโคสผูกพันที่เราใช้ในการเรืองแสงของสีย้อม thiol ปฏิกิริยา Badan ที่แนบมากับ
TMBP เพราะการเรืองแสงของ Badan ที่แนบมากับ cysteine ​​Cys182 ของ TMBP ไม่เปลี่ยนแปลงเมื่อ
กลูโคสผูกพันในรูปแบบที่กลายพันธุ์ TMBP / C182S / X_Cys ถูกสร้างขึ้น โปรตีนกลายพันธุ์เหล่านี้ Cys182 ถูก
แทนที่ด้วย Ser ลบเว็บไซต์ที่มีผลผูกพันที่แท้จริงของ Badan และสีย้อมเว็บไซต์ใหม่ที่มีผลผูกพันถูกนำ.
เพิ่มขึ้นมากที่สุด (1.4 เท่า) ในความรุนแรงของการเรืองแสงสีย้อมได้สังเกตเมื่อ TMBP /
C182S / A14C- Badan-Glc เชิงซ้อน คงแยกออกจากกันของที่ซับซ้อนนี้คือ 3.4 ± 0.1 มม.
เราพิจารณา TMBP / C182S / A14C แบบฟอร์มการกลายพันธุ์ที่มีการแนบเรืองแสงสีย้อม Badan เป็นพื้นฐานที่ดีสำหรับ
การวิจัยต่อไปวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาชุดของ TMBP รูปแบบกลายพันธุ์ที่มีความพอใจที่แตกต่างกันเป็นน้ำตาลกลูโคส
ที่มีป้ายกำกับเรืองแสง สีย้อม