With the goal to obtain maltose pho

With the goal to obtain maltose phosphorylase as a tool to determine ortho-phosphate, the enzyme from
Lactobacillus brevis was purified to 98% by an expeditious FPLC-aided procedure which included anion
exchange chromatography, gelfiltration, and hydroxyapatite chromatography. The native maltose phosphorylase
had a molecular mass of 196 kDa and consisted of two 88 kDa subunits. In isoelectric focusing two isoforms with
pl values of 4.2 and 4.6 were observed. Maximum enzyme activity was obtained at 36°C and pH 6.5 and was
independent of pyridoxal5’-phosphate. The apparent K,,, values with maltose and phosphate as substrates were
0.9mmolI~‘and1.8mmoll~‘, respectively. Maltose phosphorylase could be stored in 10 mM phosphate buffer
pH 6.5 at 4°C with a loss of activity of only 7% up to 6 months. The stability of the enzyme at high temperatures
was enhanced significantly using additives like phosphate, citrate, and imidazole. The purified maltose
phosphorylase was used as key enzyme in a phosphate sensor consisting of maltose phosphorylase and glucose
oxidase. A detection limit of 0.1 p,M phosphate was observed and the sensor response was linear in the range

Results (Thai) 1:

มีเป้าหมายในการขอรับ maltose phosphorylase เป็นเครื่องมือในการตรวจสอบ ortho-ฟอสเฟต เอนไซม์จากบริสุทธิ์ 98% แลคโตบาซิลลัส โดยสบายช่วย FPLC ขั้นตอนการซึ่งไอออนแลกเปลี่ยน chromatography, gelfiltration และ hydroxyapatite chromatography Phosphorylase maltose เจ้ามีมวลโมเลกุลของ 196 kDa และประกอบด้วยการกำหนดสอง 88 kDa ใน isoelectric isoforms สองโฟกัสด้วยข้อสังเกตค่า pl 4.2 และ 4.6 เอนไซม์สูงสุดได้รับที่ 36 องศาเซลเซียสและค่า pH 6.5 และถูกของ pyridoxal5'-ฟอสเฟต K ชัดเจน,,, ค่า maltose และฟอสเฟตเป็นพื้นผิวได้0.9mmolI ~'and1.8mmoll ~', ตามลำดับ Maltose phosphorylase อาจจะเก็บไว้ในบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 10 มม.ค่า pH ที่ 6.5 ที่อุณหภูมิ 4° C กับการสูญเสียของกิจกรรมเพียง 7% สูงสุด 6 เดือน ความเสถียรของเอนไซม์ที่อุณหภูมิสูงได้เพิ่มขึ้นอย่างมากโดยใช้สารเติมแต่ง เช่นฟอสเฟต ซิเตรท อิมิดาโซล Maltose บริสุทธิ์ใช้ phosphorylase เป็นเอนไซม์ที่สำคัญในเซนฟอสเฟต maltose phosphorylase และกลูโคสoxidase การตรวจจับจำนวน 0.1 p, M ฟอสเฟตถูกตรวจสอบ และการตอบสนองของเซนเซอร์เป็นเชิงเส้นในช่วง

Results (Thai) 2:

โดยมีเป้าหมายที่จะได้รับโฟมอลโตสเป็นเครื่องมือในการตรวจสอบออร์โธฟอสเฟตเอนไซม์จาก
Lactobacillus brevis บริสุทธิ์ถึง 98% โดยขั้นตอนรวดเร็ว FPLC ช่วยซึ่งรวมถึงแอนไอออน
โครมาแลกเปลี่ยน gelfiltration และโครมาโตไฮดรอกซี โฟมอลโตสพื้นเมือง
มีมวลโมเลกุล 196 กิโลดาลตันและประกอบด้วยสองหน่วยย่อย 88 กิโลดาลตัน ใน Isoelectric มุ่งเน้นไปที่สองไอโซฟอร์มกับ
ค่า PL 4.2 และ 4.6 ถูกตั้งข้อสังเกต กิจกรรมของเอนไซม์สูงสุดได้ที่ 36 องศาเซลเซียสและมีค่า pH 6.5 และเป็น
อิสระจาก pyridoxal5' ฟอสเฟต ชัดเจน K ,,, ค่ากับมอลโตสและฟอสเฟตเป็นสารตั้งต้นเป็น
0.9mmolI ~ 'and1.8mmoll ~' ตามลำดับ โฟสมอลโตสจะถูกเก็บไว้ใน 10 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์
ค่า pH 6.5 ที่ 4 ° C กับการสูญเสียของกิจกรรมเพียง 7% นานถึง 6 เดือน ความมั่นคงของเอนไซม์ที่อุณหภูมิสูง
ได้รับการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญโดยใช้สารเติมแต่งเช่นฟอสเฟตซิเตรตและ imidazole มอลโตสบริสุทธิ์
โฟถูกใช้เป็นเอนไซม์สำคัญในการเซ็นเซอร์ฟอสเฟตประกอบด้วยโฟมอลโตสและกลูโคส
ออกซิเดส ขีด จำกัด การตรวจสอบ 0.1 P, M ฟอสเฟตเป็นที่สังเกตและการตอบสนองเซ็นเซอร์เป็นเชิงเส้นในช่วง